Lo scopo principale dell'utilizzo di una soluzione di etanolo al 75% nei sondaggi sul campo di Nosema è quello di agire come fissativo e conservante immediato. Al momento della raccolta, la soluzione uccide il campione di ape mellifera e arresta i suoi processi fisiologici. Ciò stabilizza il campione, prevenendo il decadimento biologico nel tempo intercorso tra la visita all'apiario e l'analisi di laboratorio.
Mettendo efficacemente in "pausa" il degrado biologico, l'etanolo al 75% garantisce che le spore di Nosema rimangano strutturalmente intatte per settimane. Ciò consente ai ricercatori di trasportare campioni su lunghe distanze senza refrigerazione, mantenendo l'accuratezza delle successive diagnosi microscopiche o molecolari.
La meccanica della conservazione del campione
Fissazione fisiologica immediata
Quando le api mellifere vengono raccolte per un sondaggio, l'ambiente interno dell'ape inizia a cambiare immediatamente dopo la morte. L'etanolo al 75% fissa lo stato fisiologico dell'ape mellifera nel momento esatto della raccolta.
Questa rapida fissazione è fondamentale perché arresta i processi metabolici che altrimenti potrebbero alterare il campione. Garantisce che il campione analizzato in laboratorio sia biologicamente identico all'ape sul campo.
Inibizione della crescita batterica
Senza un conservante, un'ape mellifera morta è suscettibile a rapida decomposizione. La soluzione di etanolo inibisce la crescita batterica e previene la putrefazione.
Ciò è essenziale perché la crescita eccessiva di batteri può oscurare le visioni microscopiche o degradare i marcatori genetici specifici necessari per il rilevamento molecolare.
Garantire l'integrità dei dati durante il trasporto
Protezione della struttura delle spore
L'accuratezza di un sondaggio su Nosema dipende interamente dalla capacità di contare o rilevare le spore. L'etanolo garantisce che le spore di Nosema rimangano strutturalmente intatte.
Se le spore dovessero degradarsi o rompersi a causa di una conservazione inadeguata, i conteggi di laboratorio sarebbero artificialmente bassi, portando a una diagnosi errata della salute della colonia.
Estensione della finestra di analisi
I sondaggi sul campo si svolgono spesso in luoghi remoti, lontani dalle strutture diagnostiche. L'uso dell'etanolo consente ai campioni di rimanere stabili per diverse settimane durante il trasporto.
Questa flessibilità elimina la necessità immediata di logistica della catena del freddo (come ghiaccio secco o congelatori portatili) direttamente sul sito di raccolta.
Considerazioni operative
L'importanza della concentrazione
È fondamentale mantenere la soluzione alla concentrazione del 75%.
Una concentrazione inferiore potrebbe non inibire efficacemente la crescita batterica, portando al degrado del campione. Al contrario, sebbene esistano concentrazioni più elevate, lo standard del 75% è specificamente ottimizzato per bilanciare la penetrazione dei tessuti con la conservazione delle spore.
Integrità del contenitore
Sebbene l'etanolo sia efficace, è volatile. Come notato nei protocolli di campionamento più ampi (come quelli per gli acari Varroa), si raccomanda l'uso di barattoli di vetro sigillati per mantenere la stabilità chimica.
Se il contenitore non è ermetico, l'etanolo potrebbe evaporare o fuoriuscire, rendendo inefficace la conservazione e portando alla perdita del campione.
Garantire risultati di laboratorio affidabili
Per garantire che il tuo sondaggio sul campo di Nosema produca dati azionabili accurati, segui queste linee guida basate sulle tue esigenze logistiche:
- Se il tuo obiettivo principale è l'integrità del campione: Assicurati che le api siano completamente immerse nella soluzione di etanolo al 75% immediatamente dopo la raccolta per prevenire qualsiasi decomposizione iniziale.
- Se il tuo obiettivo principale sono le logistica di trasporto: Utilizza contenitori sigillati di alta qualità per prevenire perdite o evaporazione dell'etanolo durante le settimane di transito.
- Se il tuo obiettivo principale è l'accuratezza diagnostica: Affidati a questo metodo sia per il conteggio microscopico che per il rilevamento molecolare, poiché l'etanolo preserva le strutture biologiche necessarie per entrambi.
Una corretta conservazione chimica è il passo più importante per tradurre le condizioni sul campo in dati di laboratorio accurati.
Tabella riassuntiva:
| Caratteristica | Funzione nei sondaggi su Nosema | Vantaggio per i ricercatori |
|---|---|---|
| Fissazione immediata | Arresta i processi metabolici e fisiologici | Garantisce che il campione corrisponda alle condizioni sul campo |
| Inibizione batterica | Previene decomposizione e putrefazione | Mantiene chiari i marcatori microscopici/DNA |
| Conservazione delle spore | Mantiene intatte le strutture delle spore | Previene falsi negativi o conteggi bassi |
| Stabilità | Consente settimane di conservazione senza refrigerazione | Semplifica il trasporto da apiari remoti |
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Riferimenti
- Shane S. Klassen, Ernesto Guzmán‐Novoa. Nosema ceranae Infections in Honey Bees (Apis mellifera) Treated with Pre/Probiotics and Impacts on Colonies in the Field. DOI: 10.3390/vetsci8060107
Questo articolo si basa anche su informazioni tecniche da HonestBee Base di Conoscenza .
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